二甲雙胍增強索拉非尼敏感性，抑制肝癌小鼠的術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移

2019-09-26 08:53

文章背景簡介

BACKGROUND INTRODUCTION

肝細(xì)胞癌（HCC）發(fā)病率很高，在男性癌癥患者中排名第五位，在女性中排名第七位。目前，手術(shù)切除被認(rèn)為是HCC的主要治療方法。然而，術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍然是HCC長期生存的主要障礙。索拉非尼是治療晚期肝癌的一線口服多激酶抑制劑。有證據(jù)表明，索拉非尼可以通過阻斷Raf ／ MEK ／ ERK信號通路抑制腫瘤細(xì)胞增殖，也可以靶向酪氨酸激酶受體血管內(nèi)皮生長因子受體－2 （VEGFR－2）或血小板衍生生長因子受體（PDGFR）抑制血管生成。然而，由于其耐藥性，索拉非尼的治療效果大打折扣，藥物利用率非常低。缺氧環(huán)境是實體瘤耐藥的重要因素之一。許多證據(jù)表明，缺氧誘導(dǎo)因子（HIFs）對腫瘤細(xì)胞適應(yīng)低氧環(huán)境至關(guān)重要。最近的研究結(jié)果顯示：索拉非尼可以降低HIF－1α的表達(dá)上調(diào)，促進缺氧反應(yīng)，導(dǎo)致HIF－2α上調(diào)。索拉非尼誘導(dǎo)的HIF－2α高表達(dá)是缺氧時肝癌細(xì)胞耐藥的主要原因。相對低劑量的索拉替尼通過降低腫瘤抑制基因HTATIP2（也稱為TIP30）促進HCC入侵和轉(zhuǎn)移，然而到目前為止，HIF－2α和TIP30之間的關(guān)系尚未報道。

二甲雙胍是一種廣泛用于治療2型糖尿病的藥物，因近年來陸續(xù)發(fā)現(xiàn)的各種作用而被譽為“一代神藥”。最近有文章指出二甲雙胍可能與降低糖尿病患者的癌癥發(fā)生率有關(guān)，包括前列腺癌、乳腺癌、胰腺癌和肝癌。此外，也有文章報道二甲雙胍可靶向NLK （Nemo－like kinase）抑制非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）細(xì)胞增殖和干細(xì)胞性。

2016年，天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所肝膽外科的Abin You等人，在《Journal of Hematology ＆ Oncology》雜志（IF2018＝8．731，醫(yī)學(xué)1區(qū)）發(fā)表了題為“Metformin sensitizes sorafenib to inhibit postoperative recurrence and metastasis of hepatocellular carcinoma in orthotopic mouse models”的文章。本文證明了二甲雙胍可以提高肝癌細(xì)胞對索拉非尼的敏感性，抑制手術(shù)切除后肝癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

所用到的主要方法

METHODS

1．Western blot

2．CCK8檢測

3．CHIP

4．流式細(xì)胞術(shù)

5．免疫組化

6．HE染色

7．動物模型

文章主要內(nèi)容摘要

ABSTRACT

背景：索拉非尼被認(rèn)為是治療晚期肝癌的標(biāo)準(zhǔn)藥物。然而，由于副作用，許多患者不得不減少劑量或終止使用索拉非尼。此外，許多患者對索拉非尼具有耐藥性。因此，研究其內(nèi)在原因，探討索拉非尼的耐藥機制，并尋求提高其療效的潛在策略是非常必要的。

方法：通過免疫印跡檢測低氧誘導(dǎo)因子（HIF－2α）、TIP30、N－cadherin、pAMPK的蛋白表達(dá)。細(xì)胞活力檢測來研究二甲雙胍和索拉非尼對細(xì)胞增殖的影響。采用Annexin V－FITC凋亡檢測方法檢測二甲雙胍和索拉非尼對細(xì)胞凋亡的影響。使用基因沉默和染色質(zhì)免疫沉淀反應(yīng)試驗探究HIF－2α和TIP30之間的關(guān)系。為探討二甲雙胍和索拉非尼對荷瘤小鼠肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)及肺轉(zhuǎn)移的影響，術(shù)后連續(xù)37天，口服二甲雙胍或索拉非尼每日一次，切除腫瘤植入的肝葉。免疫組化檢測CD31、Ki67、TUNEL。

結(jié)果：在蛋白水平，二甲雙胍與索拉非尼聯(lián)用可以減少HIF－2α表達(dá)。通過基因沉默的方法發(fā)現(xiàn)TIP30的表達(dá)受到HIF－2α的調(diào)控，染色質(zhì)免疫沉淀反應(yīng)試驗表明在缺氧條件下HIF－2α可以結(jié)合到TIP30啟動子上。CCK8細(xì)胞活力測定和Annexin V－FITC凋亡測定表明：二甲雙胍聯(lián)合索拉非尼抑制細(xì)胞增殖，促進細(xì)胞凋亡。此外，在體內(nèi)和體外實驗，聯(lián)合治療可以抑制上皮－間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程。此外，二甲雙胍聯(lián)合索拉非尼可顯著減少小鼠原位肝細(xì)胞癌模型術(shù)后復(fù)發(fā)和肺轉(zhuǎn)移。聯(lián)合治療可抑制CD31和Ki67表達(dá)，但促進TUNEL表達(dá)。總之，在缺氧條件下，低劑量的索拉非尼可以下調(diào)HIF－2α上調(diào)TIP30來促進肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲，而二甲雙胍可以增強肝癌細(xì)胞對索拉非尼的敏感性，增強藥物治療效果。